LC液相色譜儀系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經(jīng)過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，LC液相色譜儀被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，下面將分別敘述其各自的組成與特點。

 

　　選擇LC液相色譜儀入口和檢測器類型的色譜柱尺寸和墊片材料；避免氣相色譜儀重復使用墊圈；使用合適的柱切割工具（如陶瓷板或金剛石切割刀）進行柱切割；在將氣相色譜儀色譜柱安裝在進樣口和檢測器中之前，確保色譜柱頭清潔平整；安裝氣相色譜儀制造商的要求，將色譜柱安裝插入入口和檢測器的適當距離；氣相色譜儀色譜柱必須放在色譜柱上，毛細管色譜柱的任何部分都不能接觸色譜柱的壁；確?？鞠浼訜崆八薪宇^都沒有泄漏，載氣中不含氧氣；通過注射檢查LC液相色譜儀色譜柱是否正確安裝，無需保留化合物或使用氣相色譜儀軟件程序，并設定載氣的線性流速。

 

　　LC液相色譜儀的使用方法的具體步驟

 

　　1、LC液相色譜儀它包括空柱和填料?？罩莾?nèi)壁拋光的不銹鋼管，內(nèi)徑為4～5mm，長100～250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈，用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中，用柱式機械往復泵輸入新鮮脫氣的流動相。

 

　　等基線平直后可用苯、萘、菲的混合試液，用正己烷（含 0.05%甲醇）或甲醇：水（83：17）為流動相測定柱效及分離度塔板數(shù)在2～3萬/ml以上及分離度在1.5以上者，柱效好。為防止柱污染，常用1個50mm長，4~5mm內(nèi)徑，裝有硅膠（40-50mm）或立柱相同填料的保護柱（預柱）接在主柱之前，以延長色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經(jīng)，以洗去鹽類、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚，再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生。

 

　　2、流動相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動相放于貯液瓶中，經(jīng)過有濾過頭、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進入色譜柱，zui后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法，即自洗脫開始到結(jié)束，溶劑的配比恒定。

 

　　另一類為梯度洗脫法，即使溶劑的極性強度在色譜過程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，從而使同一個試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過程中很好分離，而整個色譜過程縮短。必須注意，梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學檢測的反相液相色譜法中。

 

　　3、檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線吸收，熒光發(fā)射和電化學三種。紫外檢測器應用于對紫外光有吸收的藥物，大多數(shù)藥物分子對紫外光有吸收，故能較普遍采用，檢測限有0.1μg左右。紫外檢測器有固定波長型、可變波長型及掃描器，既能使流動相停流作組分的定性定量檢測，又能提高測定靈敏度，重現(xiàn)性較好。熒光發(fā)射檢測器對能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。

 

　　80年代應用激光替代氙燈光源，光強度增加了3~4倍，對某些藥物的檢測限可達pg級。電化學檢測器是由一個碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測兒茶酚胺類及有酚類基團的各種藥物和代謝物。流出組分進入2μl的薄層電解池，在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流，放大后檢測，檢測限pg級。

 

　　4、數(shù)據(jù)處理現(xiàn)代液相色譜儀帶有數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，除記錄譜外，還能自動記錄峰的保留時間，能自動積分求算峰面積，并能按照預定的程序作有關(guān)計算，報告分析結(jié)果。

 

　　LC液相色譜儀的要求

 

　　1、流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)（使用0.45μm或更細的膜過濾）。

 

　　2、流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應該恢復到室溫后使用。

 

　　3、不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導致泵不進液。

 

　　4、使用緩沖溶液時，做完樣品后應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然后用甲醇（或甲醇水溶液）沖洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20mL以上。

 

　　5、長時間不用儀器，應該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應該用有機相（如，甲醇等），因為，純水易長霉。

 

　　6、LC液相色譜儀每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑清洗進樣器。

 

　　7、C18柱不能進蛋白樣品，血樣、生物樣品。

 

　　8、堵塞導致壓力太大，按預柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗，清洗方法：

 

　　①以異丙醇作溶劑沖洗；

 

　?、诜旁诋惐贾虚g用超聲波清洗；

 

　　③用10％稀硝酸清洗；

 

　　9、氣泡會致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。

 

　　10、如果進液管內(nèi)不進液體時，LC液相色譜儀要使用注射器吸液：通常在輸液前要進行流動相的清洗。

 

　　11、LC液相色譜儀要注意柱子的pH值范圍，不得注射強酸強堿的樣品，特別是堿性樣品。

 

　　12、更換流動相時應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗，然后插入新的流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。